Nup88 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404091-LAC

NUP88 codifica per Nup88, un componente centrale del complesso del poro nucleare che contribuisce al trasporto nucleo‑citoplasmatico organizzando l’architettura dell’NPC e modulando il traffico dei carichi attraverso l’involucro nucleare. Nup88 partecipa a vie che regolano l’esportazione dell’mRNA, l’importazione/esportazione proteica, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione responsiva allo stress tramite interazioni con altre nucleoporine e con i recettori di trasporto. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di NUP88 sono state associate a una compromissione dell’omeostasi del trasporto nucleare e a una regolazione anomala di programmi trascrizionali che influenzano proliferazione e differenziamento. Queste caratteristiche rendono NUP88 un bersaglio utile per studiare la biologia del poro nucleare, la segnalazione accoppiata al trasporto e i meccanismi che collegano la disfunzione dell’NPC a fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Nup88 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NUP88 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Nup88 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NUP88, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Nup88. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NUP88 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.