Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nup133: sc-402822-ACT

NUP133 code pour Nup133, un composant central du complexe en Y (sous-complexe Nup107–160) qui sert d’échafaudage à l’assemblage du complexe du pore nucléaire et soutient le transport nucléocytoplasmique. En organisant l’architecture du pore, Nup133 influence l’export des ARNm, l’import des protéines et le remodelage de l’enveloppe nucléaire couplé au cycle cellulaire, contribuant ainsi à façonner les programmes transcriptionnels et la stabilité du génome. Des altérations de la composition des pores nucléaires et de la dynamique des transports sont associées à des défauts de prolifération cellulaire, de différenciation et de réponses au stress, et la dérégulation des voies impliquant les nucléoporines a été reliée, dans des systèmes expérimentaux, à des troubles du développement et à des phénotypes liés au cancer. En tant que nucléoporine structurale, Nup133 est également utilisée pour étudier l’intégrité de l’enveloppe nucléaire, l’organisation de la chromatine à proximité de la périphérie nucléaire et les voies de signalisation dépendant d’un import/export nucléaires régulés.

Nup133 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUP133 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nup133 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUP133 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUP133, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nup133. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUP133 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nup133 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nup133 dans les cellules tumorales présentant une expression de NUP133 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.