NTE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406850

Übersicht

PNPLA6 kodiert die Neuropathy Target Esterase (NTE), eine membranassoziierte Phospholipase/Lysophospholipase, die Phosphatidylcholin hydrolysiert und so die Phospholipid-Homöostase reguliert. Die NTE-Aktivität unterstützt die Integrität der Membran des endoplasmatischen Retikulums, die Dynamik von Lipidtröpfchen und den Erhalt von Neuronen, indem sie die Spiegel bioaktiver Lysophospholipide steuert. Eine Störung von PNPLA6 beeinträchtigt Membranremodellierung und Lipid-Signalwege – Prozesse, die eng mit Axonstabilität und synaptischer Funktion verknüpft sind. Genetische Variationen in PNPLA6 sind mit neurodegenerativen und neuroentwicklungsbedingten Phänotypen assoziiert, was diesen Lokus für die Untersuchung lipidgetriebener Mechanismen neuronaler Vulnerabilität besonders geeignet macht.

Das NTE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PNPLA6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PNPLA6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PNPLA6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NTE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PNPLA6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NTE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PNPLA6-Exone abzielen, die für die NTE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PNPLA6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NTE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NTE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PNPLA6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NTE HDR-Plasmid (h) und NTE HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PNPLA6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PNPLA6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.