NRF-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421961

Panoramica

Il gene murino Nrf1 (NRF-1) codifica un fattore di trascrizione che coordina il controllo nucleare della biogenesi mitocondriale e della funzione respiratoria regolando geni coinvolti nella fosforilazione ossidativa, nei macchinari di trascrizione/replicazione del DNA mitocondriale e nel metabolismo energetico cellulare. NRF-1 integra i segnali dei nutrienti e dei fattori di crescita con la progressione del ciclo cellulare e l’omeostasi redox, sostenendo la proteostasi e le risposte adattative allo stress metabolico. La disregolazione dei programmi trascrizionali dipendenti da NRF-1 è stata collegata, in modelli sperimentali, ad alterazioni della funzione mitocondriale e a fenotipi di stress ossidativo rilevanti per la neurodegenerazione, la disfunzione cardiometabolica e la riprogrammazione metabolica associata al cancro. In quanto nodo centrale del crosstalk mitocondrio–nucleo, NRF-1 è spesso studiato in vie che governano la bioenergetica, la gestione delle ROS e le reti trascrizionali che modellano la differenziazione e la resilienza allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NRF-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nrf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nrf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nrf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NRF-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nrf1 per lo studio della segnalazione di NRF-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nrf1 critici per la funzione di NRF-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nrf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NRF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NRF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nrf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NRF-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NRF-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nrf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nrf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.