Notum Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429545

Panoramica

Notum codifica una carbossilesterasi secreta che attenua la segnalazione Wnt deacilando il gruppo palmitoleato sui ligandi Wnt, riducendo così l’interazione ligando–recettore e la conseguente trascrizione dipendente da β-catenina. Nel topo, NOTUM contribuisce alla regolazione del patterning embrionale, dell’omeostasi tissutale e dell’attività della nicchia delle cellule staminali attraverso la modulazione della segnalazione canonica Wnt/Frizzled–LRP. Un’alterata attività di NOTUM è stata associata a una deregolazione dell’output della via Wnt in contesti quali il rimodellamento osseo, la dinamica dell’epitelio intestinale e i processi di neurosviluppo. In quanto freno della via Wnt, Notum è spesso studiato nella regolazione a feedback della via e nel controllo microambientale di proliferazione e differenziamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Notum (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Notum in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Notum insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Notum a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Notum.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Notum per lo studio della segnalazione di Notum, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Notum critici per la funzione di Notum
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Notum per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Notum CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Notum CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Notum. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Notum Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Notum (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Notum per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Notum definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.