Notum Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409374

Visão geral

NOTUM codifica Notum, uma carboxilesterase secretada que regula negativamente a sinalização Wnt ao desacetilar a modificação por palmitoleato nos ligantes Wnt, limitando assim a interação ligante–receptor e a transcrição a jusante dependente de β-catenina. Ao moldar a formação de gradientes de Wnt e a duração do sinal, Notum contribui para o padrão de desenvolvimento, a homeostase tecidual e a regulação do nicho de células-tronco. Alterações na atividade de NOTUM têm sido associadas a uma saída desregulada da via Wnt observada em diversos contextos de doença, incluindo biologia do câncer e distúrbios que envolvem renovação e diferenciação epitelial aberrantes. Como antagonista solúvel de Wnt, Notum também é relevante para estudos de sinalização próxima à matriz extracelular e do controle parácrino da ativação da via.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Notum (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NOTUM em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NOTUM, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NOTUM na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Notum.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NOTUM para a investigação da sinalização de Notum, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NOTUM críticos para a função Notum
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NOTUM para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Notum Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Notum Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NOTUM. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Notum Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Notum (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NOTUM para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NOTUM definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.