Plásmido Doble Nickase (m) NOS2/iNOS: sc-421928-NIC

El gen murino Nos2 codifica la sintasa de óxido nítrico inducible (NOS2/iNOS), una enzima que genera óxido nítrico a partir de L-arginina durante respuestas inflamatorias e inmunitarias innatas. NOS2 se induce a nivel transcripcional aguas abajo de vías como NF-κB, JAK/STAT y la señalización por interferón, modulando la activación de macrófagos, la defensa antimicrobiana y la regulación dependiente del estado redox de la señalización celular. Una actividad sostenida de iNOS puede provocar estrés nitrosativo y S-nitrosilación de proteínas, lo que influye en la función mitocondrial, las respuestas al daño del ADN y la apoptosis. La regulación alterada de Nos2 se ha implicado en modelos de infección, autoinmunidad, neuroinflamación, disfunción cardiovascular e inflamación asociada a tumores, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos del daño tisular mediado por el sistema inmunitario.

NOS2/iNOS El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nos2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nos2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nos2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nos2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.