Noggin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402090-ACT

Il gene umano **NOG** codifica **noggin**, una glicoproteina secreta con motivo *cystine-knot* che agisce come antagonista ad alta affinità dei ligandi della famiglia **BMP**, inclusi **BMP2**, **BMP4** e **BMP7**, limitando così la segnalazione mediata da **SMAD1/5/8**. Sequestrando le BMP, noggin contribuisce a regolare il patterning embrionale, la differenziazione osteo-condrogenica e la morfogenesi dei tessuti, con effetti a valle sulle decisioni di destino cellulare e sui programmi della matrice extracellulare. Alterazioni del dosaggio o dell’attività di **NOG** sono associate a fenotipi scheletrici dello sviluppo e a malformazioni congenite che coinvolgono la formazione delle articolazioni e il patterning craniofacciale o degli arti, riflettendo una deregolazione dell’output della via delle BMP. *In vitro*, **NOG** rappresenta un nodo chiave per analizzare il crosstalk tra le vie **BMP/TGF-β** durante la differenziazione e lungo gradienti di segnalazione guidati da morfogeni.

Noggin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NOG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Noggin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NOG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NOG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Noggin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NOG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Noggin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Noggin nelle cellule tumorali con espressione di NOG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.