Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NNT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421922
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NNT Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NNT, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NNT Antibody (B-3): sc-390236
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NNT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421922 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Nnt** codifica la nicotinamide nucleotide transhydrogenase (NNT), un enzima della membrana interna mitocondriale che accoppia la forza proton-motrice al trasferimento di un idruro tra NAD(H) e NADP(H). Generando NADPH mitocondriale, NNT supporta i sistemi antiossidanti dipendenti da glutatione e tioredossina e contribuisce a mantenere l’omeostasi redox durante la fosforilazione ossidativa. L’attività di NNT influenza il metabolismo mitocondriale, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e la suscettibilità a disfunzioni guidate dallo stress ossidativo. Alterazioni della funzione di Nnt/NNT sono state associate a fenotipi metabolici e a risposte allo stress compromesse, rendendolo rilevante per studi sulla bioenergetica mitocondriale e sulla segnalazione regolata dal redox.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NNT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nnt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nnt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nnt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NNT.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nnt per lo studio della segnalazione di NNT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Nnt critici per la funzione di NNT
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nnt per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NNT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NNT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nnt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NNT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NNT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nnt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nnt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.