NKCC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401707-ACT

ヒトのSLC12A1は、NKCC2（ナトリウム／カリウム／塩化物共輸送体2）をコードしており、上皮細胞において電気的に中性なNa⁺-K⁺-2Cl⁻の取り込みを担うアピカル膜トランスポーターです。特にネフロンのヘンレ係蹄太い上行脚で顕著に発現します。NKCC2は塩化物輸送をナトリウムおよびカリウムのフラックスと共役させることで、上皮横断的な塩の再吸収を支え、浸透圧バランスおよび尿細管での電解質処理に寄与します。NKCC2活性は、cAMP/PKAシグナル伝達、WNK–SPAK/OSR1キナーゼ経路、ならびに細胞表面におけるトランスポーター量を調整する膜輸送（トラフィッキング）過程により制御されるイオン恒常性プログラムと相互に関連しています。SLC12A1/NKCC2機能の変化は遺伝性の塩喪失性尿細管障害に関与するとされ、腎生理学、電解質異常、ならびに利尿薬応答機構の観点から広く研究されています。

NKCC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC12A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NKCC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC12A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC12A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NKCC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC12A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNKCC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC12A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNKCC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。