NKCC1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-422971-LAC

Slc12a2 は、Na⁺-K⁺-2Cl⁻ 共輸送体である NKCC1 をコードしている。NKCC1 は広範な組織で発現する電気的中性のトランスポーターで、ナトリウムおよびカリウムの勾配を塩化物イオンの細胞内流入に結び付けることで、細胞内 Cl⁻ 恒常性、細胞容積、上皮の液体分泌を調節する。マウス組織では、NKCC1 が上皮を介したイオンと水の移動に寄与し、塩化物依存性の GABA 作動性シグナル伝達を通じて神経興奮性に影響し、さらに分泌応答や浸透圧ストレス応答を支える。NKCC1 の活性は WNK–SPAK/OSR1 キナーゼシグナルと統合され、KCC 共輸送体とも機能的に相互作用して細胞内の塩化物濃度を規定する。NKCC1 に関連する輸送プロセスの調節異常は、浮腫やバリア機能障害、神経回路活動の変化、ならびに塩・水バランスの破綻を伴う病態と関連しており、Slc12a2 は輸送生物学の作用機序研究における重要な標的となる。

NKCC1 レンチウイルス活性化粒子（m）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なSlc12a2の発現上昇を可能にします。

NKCC1 レンチウイルス活性化粒子（m）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、Slc12a2転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性NKCC1の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のSlc12a2ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。