Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401702-NIC

CHRNA5 codifica la subunità accessoria α5 dei recettori nicotinici neuronali dell'acetilcolina (nAChR), che si assembla con altre subunità α e β per modulare l'apertura del canale cationico attivato dal ligando, la permeabilità al Ca²⁺ e la desensibilizzazione del recettore. Attraverso la segnalazione colinergica, gli nAChR contenenti α5 influenzano l'eccitabilità di membrana e il rilascio di neurotrasmettitori, collegandosi a valle a vie calcio-dipendenti e a programmi di plasticità sinaptica. La variazione genetica e l'alterata espressione di CHRNA5 sono state associate alla dipendenza da nicotina e a fenotipi legati al fumo, e sono state inoltre studiate nel contesto di tratti neuropsichiatrici e della biologia dell'epitelio delle vie aeree rilevante per l'esposizione al fumo. In quanto subunità modulatrice, CHRNA5 rappresenta uno strumento maneggevole per analizzare come la composizione del recettore regoli la funzione dei circuiti colinergici e le risposte trascrizionali dipendenti dallo stimolo.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRNA5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRNA5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRNA5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRNA5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.