NFAT5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401359

Übersicht

NFAT5 (nuclear factor of activated T cells 5), auch bekannt als TonEBP, ist ein Transkriptionsfaktor der Rel-Familie, der die zelluläre Anpassung an hypertonen Stress koordiniert, indem er osmoschützende Genprogramme reguliert, darunter Transporter und Enzyme, die an der Anreicherung kompatibler Osmolyte beteiligt sind. In immunologischen und epithelialen Kontexten beeinflusst NFAT5 die Zytokinproduktion, die Polarisation von Makrophagen und die Funktion von Lymphozyten und verknüpft damit osmotische Sensorik mit inflammatorischer Signalgebung und zellulären Überlebenswegen. Die NFAT5-Aktivität überschneidet sich mit MAPK- und calciumabhängigen Signalnetzwerken und trägt dazu bei, unter Stress die Proteinhomöostase sowie die Kontrolle des Zellvolumens aufrechtzuerhalten. Eine fehlregulierte NFAT5-Signalgebung wird mit entzündlichen Erkrankungen, der Physiologie des Nierenmarks und Stressantworten im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht und ist damit relevant für mechanistische Studien zur Stressadaptation und Immunregulation.

Das NFAT5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NFAT5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NFAT5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NFAT5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NFAT5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NFAT5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NFAT5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NFAT5-Exone abzielen, die für die NFAT5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NFAT5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NFAT5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NFAT5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NFAT5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NFAT5 HDR-Plasmid (h) und NFAT5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NFAT5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NFAT5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.