NF90 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402626-ACT

ILF3 codifica a NF90, uma proteína multifuncional de ligação a RNA de dupla fita que regula a expressão gênica nos níveis transcricional e pós-transcricional por meio do controle da estabilidade do mRNA, do splicing, do transporte e da tradução. A NF90 participa do processamento de RNA e de programas responsivos ao estresse, incluindo sinalização antiviral e regulação de genes inflamatórios, e pode modular a progressão do ciclo celular por meio de interações com a maquinaria de transcrição e de maturação de RNA. Por meio dessas funções, ILF3/NF90 influencia vias como a expressão de genes estimulados por interferon, a vigilância de RNA e a montagem de complexos ribonucleoproteicos. Atividade desregulada de NF90 e expressão alterada de ILF3 foram relatadas em contextos relevantes para a biologia do câncer, inflamação mediada pelo sistema imune e infecção viral, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de regulação gênica.

NF90 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ILF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NF90 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ILF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ILF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NF90. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ILF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NF90 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NF90 em células tumorais com expressão de ILF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.