Neuroplastin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422859

Übersicht

Das Mausgen **Nptn** kodiert **Neuroplastin**, ein glykosyliertes Zelladhäsionsprotein der Immunglobulin-Superfamilie, das an Synapsen und in weiteren Membrankompartimenten angereichert ist. Dort unterstützt es das Neuritenwachstum, die synaptische Organisation und aktivitätsabhängige Plastizität. Neuroplastin fungiert zudem als essenzielle Hilfsuntereinheit von **Ca²⁺-ATPasen der Plasmamembran (PMCA)** und verknüpft **Nptn** damit mit der intrazellulären Calciumhomöostase sowie Ca²⁺-regulierter Signalübertragung, die Erregbarkeit und Genexpression formt. Über diese Funktionen trägt **Nptn** zur Schaltkreisentwicklung und zu synaptischen Umbauprozessen bei, die für neuroentwicklungsbezogene und neuropsychiatrische Phänotypen relevant sind, ebenso wie für breitere Defekte infolge einer dysregulierten Calciumverarbeitung. Seine Membranlokalisation und sein Interaktionsnetzwerk machen es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signalwege, der Synapsenreifung und calciumabhängiger Pfade in neuronalen und glialen Mausmodellen.

Das Neuroplastin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nptn-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nptn-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nptn nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Neuroplastin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nptn-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Neuroplastin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nptn-Exone abzielen, die für die Neuroplastin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nptn-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Neuroplastin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Neuroplastin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nptn-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Neuroplastin HDR-Plasmid (m) und Neuroplastin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nptn-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nptn-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.