Neuroplastin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422859

Panoramica

Il gene murino **Nptn** codifica la **neuroplastina**, una proteina di adesione cellulare glicosilata appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, arricchita nelle sinapsi e in altri compartimenti di membrana, dove sostiene la crescita dei neuriti, l’organizzazione sinaptica e la plasticità dipendente dall’attività. La neuroplastina funge inoltre da subunità ausiliaria essenziale delle **ATPasi Ca²⁺ di membrana plasmatica (PMCA)**, collegando **Nptn** all’omeostasi del calcio intracellulare e alla segnalazione regolata dal Ca²⁺ che modella l’eccitabilità e l’espressione genica. Attraverso questi ruoli, **Nptn** contribuisce allo sviluppo dei circuiti e ai processi di rimodellamento sinaptico rilevanti per fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, nonché per difetti più generali derivanti da una gestione disregolata del calcio. La sua localizzazione di membrana e la rete di interazioni ne fanno un nodo utile per studiare la segnalazione dipendente dall’adesione, la maturazione sinaptica e le vie calcio-dipendenti in modelli neuronali e gliali murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuroplastin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nptn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nptn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nptn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Neuroplastin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nptn per lo studio della segnalazione di Neuroplastin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nptn critici per la funzione di Neuroplastin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nptn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Neuroplastin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Neuroplastin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nptn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Neuroplastin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Neuroplastin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nptn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nptn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.