neuroglobin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401696-ACT

O NGB humano codifica a neuroglobina, uma globina ligadora de oxigénio enriquecida em neurónios que sustenta a adaptação celular à hipóxia e ao stress oxidativo. A neuroglobina está implicada na manutenção da função mitocondrial e da homeostase redox, com funções descritas na modulação do controlo de espécies reativas de oxigénio e de vias de sinalização relacionadas com o óxido nítrico. Por meio destes processos, o NGB liga a disponibilidade de oxigénio ao metabolismo neuronal e a vias de resposta ao stress que influenciam a sobrevivência em condições isquémicas ou inflamatórias. Alterações na expressão de neuroglobina têm sido associadas à suscetibilidade à neurodegeneração e a modelos de lesão cerebrovascular, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos da resiliência neuronal.

neuroglobin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NGB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

neuroglobin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NGB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NGB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de neuroglobin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NGB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de neuroglobin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via neuroglobin em células tumorais com expressão de NGB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.