neurexin I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401872

Descripción general

NRXN1 codifica la neurexina I, una molécula presináptica de adhesión celular que organiza la formación y maduración de las sinapsis al interactuar con socios postsinápticos como las neuroliginas y las LRRTM. Mediante el empalme alternativo y la diversidad de isoformas, la neurexina I modula el equilibrio sináptico excitatorio e inhibitorio, regula la probabilidad de liberación de neurotransmisores y sostiene la señalización transináptica importante para la conectividad de las redes neuronales. La función de NRXN1 se entrecruza con vías que gobiernan el ciclo de las vesículas sinápticas, la exocitosis dependiente de calcio y la plasticidad sináptica dependiente de la actividad. La alteración genética o las variaciones en el número de copias de NRXN1 se han vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que lo convierte en un locus clave para estudios mecanísticos en sistemas neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO neurexin I (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NRXN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NRXN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NRXN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína neurexin I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NRXN1 para la investigación de la señalización de neurexin I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NRXN1 críticos para la función de neurexin I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NRXN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido neurexin I CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido neurexin I CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NRXN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR neurexin I (h) y el plásmido HDR neurexin I (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NRXN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NRXN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.