Plasmide CRISPR/Cas9 KO neurexin I (h): sc-401872

Présentation

NRXN1 code la néurexine I, une molécule d’adhérence cellulaire présynaptique qui organise la formation et la maturation des synapses en interagissant avec des partenaires postsynaptiques tels que les neuroligines et les LRRTM. Grâce à l’épissage alternatif et à la diversité de ses isoformes, la néurexine I module l’équilibre entre synapses excitatrices et inhibitrices, régule la probabilité de libération des neurotransmetteurs et soutient une signalisation transsynaptique essentielle à la connectivité des réseaux neuronaux. La fonction de NRXN1 recoupe des voies impliquées dans le cycle des vésicules synaptiques, l’exocytose dépendante du calcium et la plasticité synaptique dépendante de l’activité. Des altérations génétiques ou des variations du nombre de copies de NRXN1 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait un locus clé pour des études mécanistiques dans les systèmes neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO neurexin I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NRXN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NRXN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NRXN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine neurexin I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NRXN1 pour l'étude de la signalisation de neurexin I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NRXN1 essentiels à la fonction de neurexin I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NRXN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le neurexin I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le neurexin I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NRXN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le neurexin I plasmide HDR (h) et le neurexin I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NRXN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NRXN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.