Net Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420157

Panoramica

Elk3 codifica il fattore di trascrizione Net della famiglia ETS, un regolatore dipendente dal contesto che integra la segnalazione MAPK/ERK con i complessi del serum response factor (SRF) per modulare i programmi genici a risposta immediata. Net si lega ai motivi ETS in promotori ed enhancer e può agire da repressore o attivatore della trascrizione a seconda dello stato di fosforilazione e della disponibilità di cofattori, influenzando transizioni dello stato cellulare legate a proliferazione, migrazione e differenziazione. Nei sistemi murini, l’attività di Elk3/Net è spesso studiata nella biologia vascolare e stromale, dove il circuito ETS–SRF influenza l’espressione di geni angiogenici e il rimodellamento tissutale. La deregolazione delle reti trascrizionali ETS è implicata nella segnalazione oncogenica, in fenotipi invasivi e in risposte vascolari aberranti, rendendo Elk3 un nodo utile per interrogare in modo meccanicistico le vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Net (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Elk3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Elk3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Elk3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Net.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Elk3 per lo studio della segnalazione di Net, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Elk3 critici per la funzione di Net
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Elk3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Net CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Net CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Elk3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Net Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Net (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Elk3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Elk3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.