Particules Lentivirales d'Activation (h) nestin: sc-400156-LAC

Le gène humain **NES** code la nestine, une protéine de filament intermédiaire de classe VI qui sert de marqueur des cellules souches/progénitrices neurales ainsi que d’autres états cellulaires prolifératifs et indifférenciés. La nestine contribue à l’organisation du cytosquelette et à la mécanique cellulaire lors de la mitose, de la migration et de l’engagement de lignée, et elle interagit fonctionnellement avec des programmes de remodelage du cytosquelette coordonnés avec la signalisation des facteurs de croissance. L’expression de **NES** est régulée de manière dynamique au cours du développement et est réinduite lors de la réparation tissulaire et des réponses au stress cellulaire, reflétant des changements vers des programmes transcriptionnels de type progéniteur. Une expression dérégulée de la nestine est fréquemment associée à la plasticité des cellules tumorales et à des phénotypes invasifs, ce qui en fait un indicateur moléculaire utile dans les études portant sur la « stemness », la différenciation et la biologie du cancer.

Les particules d'activation lentivirales nestin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NES dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales nestin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NES, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de nestin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NES ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.