nephrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400368

Übersicht

NPHS1 kodiert Nephrin, ein transmembranöses Protein der Immunglobulin-Superfamilie, das für die Architektur und Signalübertragungsfunktionen der Schlitzmembran (slit diaphragm) der Podozyten im renalen Glomerulum essenziell ist. Nephrin ist über Interaktionen mit Adapterproteinen und nachgeschalteten, phosphorylierungsabhängigen Signalwegen an der Organisation von Zell-Zell-Kontakten sowie an der Regulation des Aktin-Zytoskeletts beteiligt und trägt so zur Integrität der Filtrationsbarriere bei. Eine Störung von NPHS1 beeinträchtigt die Struktur der Schlitzmembran, verändert Podozytenadhäsion und Überlebenssignale und ist mit proteinurischen Nierenphänotypen einschließlich des kongenitalen nephrotischen Syndroms assoziiert. NPHS1 ist daher ein zentrales Ziel für die Untersuchung der Podozytenbiologie, der Dynamik der Filtrationsbarriere und von Signalmechanismen an Zellkontakten.

Das nephrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NPHS1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NPHS1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NPHS1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die nephrin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NPHS1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der nephrin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NPHS1-Exone abzielen, die für die nephrin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NPHS1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom nephrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom nephrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NPHS1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das nephrin HDR-Plasmid (h) und nephrin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NPHS1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NPHS1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.