Plásmido CRISPR de Activación (h) NEIL2: sc-408091-ACT

NEIL2 (endonucleasa tipo VIII 2) es una ADN glicosilasa/liasa AP que inicia la reparación por escisión de bases al reconocer y eliminar lesiones oxidativas del ADN, incluidas las que surgen en ADN monocatenario, asociado a la transcripción y en replicación. Al acoplar el reconocimiento de la lesión con la incisión de la hebra, NEIL2 ayuda a mantener la estabilidad del genoma y modula la fidelidad transcripcional bajo estrés oxidativo, intersectando funcionalmente con factores de la BER como APEX1, POLB, XRCC1 y los pasos posteriores de ligación. La actividad de NEIL2 se vincula a las respuestas celulares frente a las especies reactivas de oxígeno y la inflamación, procesos que moldean la carga mutacional y la señalización de estrés en muchos contextos biológicos. La desregulación de la capacidad de reparación oxidativa del ADN que involucra a NEIL2 se ha estudiado en relación con la inestabilidad genómica asociada al cáncer y con mecanismos de enfermedades inflamatorias crónicas, lo que respalda su relevancia en la biología del daño del ADN.

NEIL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NEIL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NEIL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NEIL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NEIL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NEIL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NEIL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NEIL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NEIL2 en células tumorales con expresión de NEIL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.