Plásmido Doble Nickase (m) NEDD4: sc-421848-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)NEDD4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NEDD4 (m) y el plásmido de doble nickasa NEDD4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Nedd4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NEDD4 Anticuerpo (F-11): sc-518160
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) NEDD4 | sc-421848-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) NEDD4 | sc-421848-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Nedd4 del ratón codifica la ligasa E3 de ubiquitina NEDD4, una enzima con dominio HECT que regula el recambio de proteínas y la amplitud de la señalización al catalizar la ubiquitinación de receptores de membrana, transportadores y adaptadores de señalización. Mediante interacciones con sustratos y proteínas adaptadoras que contienen motivos PPxY, NEDD4 influye en la endocitosis, el tráfico vesicular y la proteostasis, y converge con vías como la señalización de EGFR/RTK, PI3K–AKT y TGF-β/SMAD. NEDD4 también modula la abundancia de canales iónicos y transportadores, contribuyendo al transporte epitelial y a la excitabilidad neuronal. La actividad desregulada de NEDD4 se ha vinculado en la literatura con alteraciones de la señalización de crecimiento, respuestas inmunitarias e inflamatorias, y fenotipos relevantes para la biología del cáncer y los trastornos del neurodesarrollo, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la regulación dependiente de ubiquitina.
NEDD4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nedd4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nedd4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nedd4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nedd4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.