NDUFS4 Plasmide Double Nickase (h): sc-405184-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NDUFS4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NDUFS4 Double Nickase Plasmid (h) e il NDUFS4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NDUFS4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NDUFS4 Antibody (A-7): sc-514002
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NDUFS4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405184-NIC | 20 µg | $410.00 |
NDUFS4 codifica una subunità accessoria del complesso I della catena respiratoria mitocondriale (NADH:ubichinone ossidoreduttasi) che ne supporta l’assemblaggio e la stabilità nella membrana mitocondriale interna. Consentendo un efficiente trasferimento di elettroni dal NADH all’ubichinone, NDUFS4 contribuisce alla fosforilazione ossidativa, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e alla regolazione dell’equilibrio redox cellulare. L’alterazione della funzione di NDUFS4 è associata a una ridotta attività del complesso I, a una gestione modificata delle specie reattive dell’ossigeno e a un rimodellamento metabolico che può influenzare le reti di segnalazione bioenergetica. Varianti in NDUFS4 sono associate a fenotipi di carenza del complesso I mitocondriale, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione mitocondriale e sulle risposte allo stress.
NDUFS4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NDUFS4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NDUFS4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NDUFS4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NDUFS4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.