NDUFS1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-416401-LAC

NDUFS1 codifica uma subunidade central essencial do complexo I mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorredutase), que sustenta a fosforilação oxidativa ao transferir elétrons do NADH para a ubiquinona e contribuir para o bombeamento de prótons através da membrana mitocondrial interna. Por meio de seu papel na cadeia de transporte de elétrons, NDUFS1 influencia a produção celular de ATP, a manutenção do potencial de membrana mitocondrial e a homeostase redox, com efeitos a jusante na sinalização por espécies reativas de oxigênio e na adaptação metabólica. A perturbação da função do complexo I está associada a fenótipos de disfunção mitocondrial que afetam tecidos com alta demanda energética e pode modular a suscetibilidade ao estresse oxidativo. Como um gene mitocondrial codificado no núcleo, NDUFS1 é amplamente estudado em bioenergética, controle de qualidade mitocondrial e modelos relevantes de doença relacionados ao comprometimento da cadeia respiratória.

As Partículas de Ativação Lentivirais NDUFS1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NDUFS1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NDUFS1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NDUFS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NDUFS1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NDUFS1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.