NDR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402716

Übersicht

STK38 kodiert die Serin/Threonin-Kinase NDR1, eine Kinase der AGC-Familie, die nachgeschaltet von MST1/2 in Hippo-verwandten Signalwegen wirkt und die Zellzyklusprogression, die Centrosomenbiologie, Apoptose sowie die Organisation des Zytoskeletts reguliert. Die Aktivität von NDR1 wird durch Phosphorylierung und die Bindung von Kofaktoren (einschließlich MOB-Proteinen) gesteuert und verknüpft so vorgeschaltete Stress- und Polaritätssignale mit transkriptionellen und strukturellen Effekten. Aufgrund ihrer Rollen in der Mitosekontrolle, in DNA-schadensassoziierten Antworten und in der epithelialen Homöostase wurde STK38/NDR1 in Zusammenhängen untersucht, die für Tumorbiologie, Neurobiologie und entzündungsbezogene Signalgebung relevant sind. Störungen NDR1-abhängiger Signalwege können Proliferations-, Überlebens- und Migrationsphänotypen beeinflussen, die häufig in mechanistischen Krankheitsmodellen analysiert werden.

Das NDR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STK38-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STK38-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STK38 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NDR1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STK38-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NDR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STK38-Exone abzielen, die für die NDR1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STK38-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NDR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NDR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STK38-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NDR1 HDR-Plasmid (h) und NDR1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STK38-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STK38-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.