Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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NDR1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402716
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NDR1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NDR1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NDR1 Antibody (A-8): sc-365555
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NDR1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402716 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
STK38 codifica la chinasi serina/treonina NDR1, una chinasi della famiglia AGC che agisce a valle di MST1/2 nella segnalazione correlata a Hippo per regolare la progressione del ciclo cellulare, la biologia del centrosoma, l’apoptosi e l’organizzazione del citoscheletro. L’attività di NDR1 è controllata dalla fosforilazione e dal legame con cofattori (incluse le proteine MOB), collegando segnali a monte legati a stress e polarità a output trascrizionali e strutturali. Grazie ai suoi ruoli nel controllo mitotico, nelle risposte associate al danno al DNA e nell’omeostasi epiteliale, STK38/NDR1 è stato studiato in contesti rilevanti per la biologia tumorale, la neurobiologia e la segnalazione legata all’infiammazione. L’alterazione delle vie dipendenti da NDR1 può influenzare fenotipi di proliferazione, sopravvivenza e migrazione comunemente analizzati in modelli meccanicistici di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NDR1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STK38 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STK38 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STK38 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NDR1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STK38 per lo studio della segnalazione di NDR1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni STK38 critici per la funzione di NDR1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STK38 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NDR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NDR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STK38. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NDR1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NDR1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STK38 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STK38 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.