Na⁺ CP type Iβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422819

Descripción general

Scn1b codifica la subunidad β1 del canal de sodio (Na+ CP tipo Iβ), un componente auxiliar que modula la compuerta (gating) de los canales de sodio dependientes de voltaje, su expresión en la superficie celular y la estabilidad del complejo del canal en membranas excitables. Además de contribuir al inicio y la propagación del potencial de acción, SCN1B participa en interacciones neurona–glía y en procesos de adhesión celular que influyen en la excitabilidad de la red y en la función de los axones mielinizados. En el ratón, la actividad de Scn1b está estrechamente vinculada a vías que regulan la excitabilidad de membrana, la transmisión sináptica y la susceptibilidad a convulsiones, y la alteración de la función de β1 se ha asociado con epilepsia y con fenotipos neurodel desarrollo más amplios. Estas propiedades hacen de Scn1b una diana útil para desentrañar mecanismos que conectan la regulación de canales iónicos con la excitabilidad a nivel de circuito y con modelos de enfermedad neurológica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scn1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scn1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scn1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Na+ CP type Iβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scn1b para la investigación de la señalización de Na+ CP type Iβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scn1b críticos para la función de Na+ CP type Iβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scn1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scn1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Na+ CP type Iβ (m) y el plásmido HDR Na+ CP type Iβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scn1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scn1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.