Na⁺ CP type Iα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422818

Übersicht

Scn1a kodiert die α‑Untereinheit des spannungsabhängigen Natriumkanals Na+ CP Typ Iα, einen zentralen Determinanten für die Initiation und Weiterleitung von Aktionspotenzialen in Neuronen. Indem es schnelle einwärtsgerichtete Na+-Ströme am Axoninitialsegment und an den Ranvier-Schnürringen steuert, prägt es neuronale Erregungsschwellen, Spike‑Timing und die Synchronität neuronaler Netzwerke. Die Scn1a‑Funktion ist mit dem exzitatorisch‑inhibitorischen Gleichgewicht, aktivitätsabhängiger Signalübertragung und der Ionenhomöostase verknüpft, die die synaptische Transmission und die Stabilität neuronaler Schaltkreise beeinflussen. Genetische und funktionelle Störungen von SCN1A sind stark mit einer erhöhten Anfallsanfälligkeit und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert und machen es zu einem wichtigen Genort für mechanistische Studien in Mausmodellen.

Das Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scn1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scn1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scn1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Na+ CP type Iα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scn1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Na+ CP type Iα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scn1a-Exone abzielen, die für die Na+ CP type Iα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scn1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scn1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Na+ CP type Iα HDR-Plasmid (m) und Na+ CP type Iα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scn1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scn1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.