Nanos2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404123

Panoramica

NANOS2 codifica Nanos2, una proteina legante l’RNA evolutivamente conservata che agisce come regolatore post-trascrizionale del destino delle cellule germinali. Nella biologia umana, NANOS2 è associato al mantenimento dell’identità della linea germinale maschile, promuovendo programmi di differenziazione degli spermatogoni e reprimendo l’ingresso aberrante nella meiosi tramite il controllo della stabilità e della traduzione degli mRNA. La sua funzione si intreccia con le reti regolatorie della linea germinale e con processi associati ai granuli di RNA che modellano il rimodellamento del trascrittoma durante la gametogenesi. La disregolazione delle vie di sviluppo delle cellule germinali che coinvolgono le proteine della famiglia NANOS è rilevante per gli studi su infertilità, disturbi dello sviluppo gonadico e biologia dei tumori a cellule germinali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NANOS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NANOS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NANOS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nanos2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NANOS2 per lo studio della segnalazione di Nanos2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NANOS2 critici per la funzione di Nanos2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NANOS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nanos2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nanos2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NANOS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nanos2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nanos2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NANOS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NANOS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.