Nanos1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404414-ACT

Il gene umano **NANOS1** codifica **Nanos1**, una proteina legante l’RNA evolutivamente conservata che regola l’espressione genica post-trascrizionale nelle cellule germinali modulando la stabilità degli mRNA e la loro traduzione. **NANOS1** partecipa ai programmi di mantenimento e differenziamento della linea germinale attraverso la repressione di specifici trascritti, sostenendo le decisioni sul destino cellulare, la sopravvivenza e il controllo del ciclo cellulare. Un’attività deregolata di **NANOS1** è stata associata a spermatogenesi compromessa e a fenotipi di infertilità maschile; inoltre, un’espressione alterata è stata riportata in alcuni contesti tumorali in cui vengono attivate in modo ectopico vie associate alla linea germinale. Queste caratteristiche rendono **NANOS1** un nodo utile per studiare le reti regolatorie dell’RNA, il controllo genico durante lo sviluppo e i meccanismi che collegano i fattori della linea germinale alla plasticità cellulare.

Nanos1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NANOS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nanos1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NANOS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NANOS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nanos1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NANOS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nanos1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nanos1 nelle cellule tumorali con espressione di NANOS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.