Plásmido CRISPR de Activación (h) Nanog: sc-418033-ACT

El gen humano **NANOG** codifica el factor de transcripción homeobox **Nanog**, un regulador central de la pluripotencia que mantiene la autorrenovación de las células madre embrionarias y suprime el compromiso hacia linajes diferenciados. Nanog actúa dentro de la red central de pluripotencia junto con **OCT4** y **SOX2**, coordinando programas transcripcionales y estados de cromatina que influyen en la diferenciación, la remodelación epigenética y las decisiones de destino celular. La expresión desregulada de **NANOG** se asocia con fenotipos similares a los de células madre, señales del desarrollo alteradas y reprogramación transcripcional observadas en diversos modelos de enfermedad, incluidos contextos de biología del cáncer en los que se estudian la plasticidad de las células tumorales y estados asociados a la resistencia. Como factor nuclear de unión al ADN, Nanog constituye un nodo manejable para investigar la circuitería transcripcional que subyace al desarrollo y a la identidad celular.

Nanog El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NANOG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nanog El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NANOG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NANOG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nanog. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NANOG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nanog en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nanog en células tumorales con expresión de NANOG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.