Plásmido CRISPR de Activación (h) N-Ras: sc-400180-ACT

NRAS codifica la pequeña GTPasa humana N-Ras, un interruptor molecular asociado a la membrana que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para transmitir señales procedentes de receptores tirosina quinasas y otras entradas aguas arriba. La N-Ras activa regula vías centrales de crecimiento y supervivencia, incluidas RAF–MEK–ERK (MAPK) y PI3K–AKT, e influye en la proliferación, la diferenciación y la dinámica del citoesqueleto. La señalización desregulada de NRAS se estudia con frecuencia en contextos oncogénicos, donde un flujo alterado de las vías promueve programas transcripcionales aberrantes y la aptitud celular. Como nodo central de la señalización impulsada por Ras, NRAS se utiliza ampliamente para investigar el reconfigurado de vías, la regulación por retroalimentación y las respuestas dependientes del contexto a señales extracelulares.

N-Ras El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NRAS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

N-Ras El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NRAS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NRAS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de N-Ras. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NRAS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de N-Ras en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía N-Ras en células tumorales con expresión de NRAS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.