N-Myc Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421918

Descripción general

Mycn codifica el factor de transcripción N-Myc, un miembro de la familia MYC que se une a motivos E-box para regular programas génicos que controlan la progresión del ciclo celular, el metabolismo biosintético, la biogénesis de ribosomas y la determinación de linaje durante el desarrollo embrionario. En sistemas de ratón, N-Myc es crucial para la expansión de progenitores neurales y mesenquimales y coordina entradas de señalización de vías como PI3K–AKT–mTOR y MAPK para modular la proliferación y la diferenciación. La actividad desregulada de MYCN está fuertemente vinculada con la transformación oncogénica, la alteración del estado de la cromatina y el estrés replicativo, lo que lo convierte en un nodo central en estudios de tumorigenia y biología del desarrollo. Las redes dependientes de N-Myc también se entrecruzan con las respuestas al daño del ADN y la apoptosis, lo que permite el análisis mecanístico del control del crecimiento y de las decisiones de destino celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO N-Myc (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mycn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mycn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mycn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína N-Myc.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mycn para la investigación de la señalización de N-Myc, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mycn críticos para la función de N-Myc
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mycn para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido N-Myc CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido N-Myc CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mycn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR N-Myc (m) y el plásmido HDR N-Myc (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mycn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mycn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.