Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin VI (h): sc-401815

Présentation

MYO6 code la myosine VI humaine, un moteur non conventionnel basé sur l’actine qui, de façon unique, se déplace vers l’extrémité moins des filaments d’actine afin de soutenir le trafic intracellulaire et la dynamique membranaire. La myosine VI participe à l’endocytose médiée par la clathrine, au tri endosomal, au transport au niveau de l’appareil de Golgi et de la voie sécrétoire, ainsi qu’à l’organisation de structures riches en actine telles que les microvillosités et les stéréocils. Par ses interactions avec des protéines adaptatrices et des cargaisons, elle contribue à la migration et à l’adhérence cellulaires ainsi qu’à des processus mécanosensoriels, reliant le remodelage du cytosquelette au transport vésiculaire. Une dérégulation de MYO6 a été associée à des phénotypes liés à l’audition et à une organisation épithéliale altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie sensorielle et des défauts de trafic dépendant du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin VI (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin VI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO6 pour l'étude de la signalisation de Myosin VI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO6 essentiels à la fonction de Myosin VI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin VI plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin VI plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin VI plasmide HDR (h) et le Myosin VI (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.