Myosin Va CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402108

Übersicht

MYO5A kodiert Myosin Va, ein aktinbasiertes Motorprotein, das den Langstreckentransport membranumhüllter Organellen und Proteinkomplexe entlang des kortikalen Aktinnetzwerks antreibt. Myosin Va wirkt mit Rab-GTPasen und Adapterproteinen zusammen, um den Vesikeltransport, endozytotisches Recycling, die Dynamik sekretorischer Granula sowie die polarisierte Zustellung von Fracht in Neuronen, Melanozyten und Immunzellen zu regulieren. Diese Prozesse tragen zur synaptischen Funktion, zur Verteilung von Melanosomen und zur zellulären Polarisation bei und verknüpfen Störungen der MYO5A-Aktivität mit neurologischen und Pigmentierungsphänotypen. In humanen Zellmodellen kann ein veränderter, Myosin-Va-abhängiger Transport kompartimentiertes Signaling und die Zytoskelettorganisation beeinflussen, was für krankheitsassoziierte zelluläre Dysfunktionen relevant ist.

Das Myosin Va CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYO5A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYO5A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYO5A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin Va-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYO5A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin Va-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYO5A-Exone abzielen, die für die Myosin Va-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYO5A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin Va CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Myosin Va CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYO5A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin Va HDR-Plasmid (h) und Myosin Va HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYO5A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYO5A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.