Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Va (h): sc-402108

Présentation

MYO5A code la myosine Va, une protéine motrice dépendante de l’actine qui assure le transport à longue distance d’organites délimités par une membrane et de complexes protéiques le long du réseau cortical d’actine. La myosine Va coopère avec des GTPases Rab et des protéines adaptatrices pour réguler le trafic vésiculaire, le recyclage endocytique, la dynamique des granules de sécrétion et l’acheminement polarisé des cargaisons dans les neurones, les mélanocytes et les cellules immunitaires. Ces processus contribuent à la fonction synaptique, à la distribution des mélanosomes et à la polarisation cellulaire, reliant l’activité de MYO5A à des phénotypes neurologiques et de pigmentation lorsqu’elle est perturbée. Dans des modèles cellulaires humains, une altération du transport dépendant de la myosine Va peut influencer la signalisation compartimentée et l’organisation du cytosquelette, aspects pertinents pour des dysfonctionnements cellulaires associés à des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Va (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO5A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO5A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin Va.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO5A pour l'étude de la signalisation de Myosin Va, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO5A essentiels à la fonction de Myosin Va
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO5A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin Va plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin Va plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO5A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin Va plasmide HDR (h) et le Myosin Va (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO5A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO5A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.