Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin IIIb (h): sc-414483

Présentation

MYO3B code la myosine IIIb, une protéine motrice dépendante de l’actine qui couple l’hydrolyse de l’ATP au déplacement le long de la F‑actine et participe au remodelage du cytosquelette. Les membres de la famille des myosines III sont impliqués dans la régulation de la dynamique des protrusions membranaires et de l’organisation des faisceaux d’actine, des processus essentiels à la polarité cellulaire, au trafic vésiculaire et aux modifications de l’architecture cellulaire induites par les signaux. Par ces rôles, MYO3B soutient des comportements cellulaires entraînés par l’actine, tels que la migration et l’adhésion, en interaction avec des voies qui contrôlent la tension du cytosquelette et la mécanotransduction. La dérégulation des réseaux actine–myosine est largement impliquée dans des pathologies touchant l’intégrité épithéliale et la structure des cellules neurosensorielles, ce qui fait de MYO3B une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin IIIb (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin IIIb.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO3B pour l'étude de la signalisation de Myosin IIIb, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO3B essentiels à la fonction de Myosin IIIb
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin IIIb plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin IIIb plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin IIIb plasmide HDR (h) et le Myosin IIIb (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.