Myosin Id Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403425

Descripción general

MYO1D codifica la miosina Id, una miosina no convencional basada en actina implicada en la organización del citoesqueleto cortical y en la regulación de la dinámica de la membrana. A través de interacciones con filamentos de actina y complejos asociados a la membrana, MYO1D contribuye a la polaridad celular, el tráfico vesicular y procesos relacionados con la motilidad que influyen en la arquitectura tisular. La alteración de la expresión o la función de MYO1D se ha asociado, en diversos contextos, con una remodelación desregulada del citoesqueleto y con redes de señalización vinculadas a la organización epitelial, la migración y la biología tumoral. Como efector mecanocquímico en la periferia celular, MYO1D se estudia por su papel en acoplar la dinámica de la actina con la tensión de membrana y el transporte direccional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin Id (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MYO1D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MYO1D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MYO1D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin Id.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MYO1D para la investigación de la señalización de Myosin Id, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MYO1D críticos para la función de Myosin Id
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MYO1D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin Id CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Myosin Id CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MYO1D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin Id (h) y el plásmido HDR Myosin Id (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MYO1D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MYO1D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.