Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Ia (m): sc-436599

Présentation

Myo1a code la myosine Ia, un moteur dépendant de l’actine enrichi dans les cellules épithéliales polarisées, où elle soutient la structure des microvillosités et le couplage membrane–cytosquelette à la surface apicale. La myosine Ia contribue à la dynamique des filaments d’actine, à la tension membranaire et aux processus de trafic vésiculaire qui aident à maintenir l’organisation de la bordure en brosse et la fonction de barrière épithéliale. Par ses interactions avec le réseau d’actine cortical, elle influence des voies contrôlant la polarité cellulaire, l’absorption et les réponses mécaniques de l’épithélium intestinal. Une altération de la fonction ou de l’expression de MYO1A a été associée à une dérégulation épithéliale et a été étudiée en pathobiologie gastro-intestinale, notamment dans des contextes d’atteinte de la barrière et de tumorigenèse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Ia (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Myo1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Myo1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Myo1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin Ia.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Myo1a pour l'étude de la signalisation de Myosin Ia, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Myo1a essentiels à la fonction de Myosin Ia
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Myo1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin Ia plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Myosin Ia plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Myo1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin Ia plasmide HDR (m) et le Myosin Ia (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Myo1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Myo1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.