Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
MuRF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400797
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MuRF1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MuRF1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MuRF1 Anticuerpo (C-11): sc-398608
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MuRF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400797 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TRIM63 codifica la ligasa E3 de ubiquitina específica del músculo MuRF1, una proteína con dominio RING que se localiza en estructuras sarcoméricas y promueve el recambio dependiente de ubiquitina de proteínas contráctiles y reguladoras. MuRF1 actúa dentro del sistema ubiquitina–proteasoma y se coordina con la autofagia y las vías de señalización de respuesta al estrés para remodelar las miofibrillas durante la privación de nutrientes, la desnervación y las señales inflamatorias. Su regulación transcripcional y postraduccional se interseca con programas de atrogenes impulsados por FOXO, la señalización insulina/IGF-1–AKT y vías catabólicas asociadas a NF-κB. La actividad desregulada de TRIM63 se ha vinculado a fenotipos de atrofia del músculo esquelético y a una homeostasis muscular alterada, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios de proteostasis, metabolismo y mecanismos de desgaste muscular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MuRF1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRIM63 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRIM63 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRIM63 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MuRF1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRIM63 para la investigación de la señalización de MuRF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TRIM63 críticos para la función de MuRF1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRIM63 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MuRF1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MuRF1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRIM63. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MuRF1 (h) y el plásmido HDR MuRF1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRIM63 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRIM63 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.