Mucin 5B/MUC5B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401077-ACT

O MUC5B codifica a mucina 5B, uma mucina formadora de gel de alto peso molecular, fortemente O-glicosilada e secretada para formar a barreira de muco viscoelástica nas vias aéreas e em outros epitélios mucosos. O MUC5B contribui para a depuração mucociliar ao regular a hidratação do muco, a reticulação dos polímeros e a captura de patógenos, integrando-se a programas de diferenciação epitelial e à sinalização inflamatória que remodelam o ambiente da superfície extracelular. Sua expressão é influenciada por vias acionadas por citocinas e pelo processamento secretório no RE/Golgi, que coordenam a biossíntese e a exportação de mucinas. Níveis desregulados de MUC5B e alterações na reologia do muco são amplamente estudados na inflamação crônica das vias aéreas e na biologia da fibrose pulmonar, tornando-o um alvo comum para modelagem mecanística da homeostase epitelial.

Mucin 5B/MUC5B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MUC5B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mucin 5B/MUC5B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MUC5B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MUC5B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mucin 5B/MUC5B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MUC5B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mucin 5B/MUC5B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mucin 5B/MUC5B em células tumorais com expressão de MUC5B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.