MTFmt Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407106

Visão geral

MTFMT codifica a metionil-tRNA formiltransferase mitocondrial (MTFmt), uma enzima que formila o Met-tRNA^Met iniciador para gerar fMet-tRNA, um substrato-chave para o início da tradução mitocondrial. Essa atividade sustenta a síntese eficiente de componentes da fosforilação oxidativa (OXPHOS) codificados pelo DNA mitocondrial e ajuda a manter a integridade da cadeia respiratória e a produção de ATP. A disrupção da MTFmt perturba a proteostase mitocondrial e pode desencadear respostas de estresse bioenergético, vinculando o gene a vias que governam a expressão gênica mitocondrial, o transporte de elétrons e a homeostase metabólica. Variações patogênicas ou função reduzida estão associadas a defeitos de tradução mitocondrial e a fenótipos compatíveis com deficiência combinada de OXPHOS, tornando o MTFMT um alvo relevante em estudos sobre mecanismos de doenças mitocondriais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MTFmt (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MTFMT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MTFMT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MTFMT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MTFmt.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MTFMT para a investigação da sinalização de MTFmt, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MTFMT críticos para a função MTFmt
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MTFMT para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MTFmt Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MTFmt Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MTFMT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MTFmt Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MTFmt (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MTFMT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MTFMT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.