MT-MMP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404075-ACT

MMP15 codifica a metaloproteinase de matriz ancorada à membrana MT-MMP-2 (MT2-MMP), uma endopeptidase dependente de zinco que remodela a matriz extracelular pericelular ao clivar colágenos, lamininas e outros substratos da matriz na superfície celular. Como parte de redes de proteases que coordenam a renovação das adesões focais, a migração celular e o crescimento invasivo, a MT2-MMP influencia a sinalização extracelular ao libertar ou ativar fatores ligados à matriz e ao modular a disponibilidade de recetores. A atividade de MMP15 cruza-se com vias associadas a integrinas e a fatores de crescimento que moldam a plasticidade epitélio–mesenquimal e a remodelação tecidular. A expressão desregulada de MT2-MMP tem sido associada ao turnover patológico da matriz observado na invasão tumoral, na fibrose e em microambientes inflamatórios, tornando-a um alvo útil para estudar programas de remodelação impulsionados por proteólise.

MT-MMP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MT-MMP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MT-MMP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MT-MMP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MT-MMP-2 em células tumorais com expressão de MMP15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.