MPST Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401643

Descripción general

La MPST humana (3-mercaptopyruvato sulfurtransferasa) es una sulfurtransferasa mitocondrial y citosólica que cataliza la conversión de 3-mercaptopyruvato en piruvato, al tiempo que genera especies reactivas de azufre y contribuye al metabolismo endógeno del sulfuro de hidrógeno (H2S) y de los persulfuros. La MPST participa en la homeostasis redox celular, en la utilización de aminoácidos azufrados y en la regulación de la persulfuración de proteínas, con efectos posteriores sobre la bioenergética mitocondrial y la señalización de respuesta al estrés. La alteración de la actividad de MPST se ha vinculado con sensibilidad al estrés oxidativo y desregulación metabólica, y los cambios en la expresión de MPST o en la señalización del azufre se estudian en contextos como la neurobiología, la señalización cardiovascular y la adaptación de células cancerosas. Como parte de la red más amplia de transulfuración y azufre reactivo, la MPST ofrece un punto de entrada mecanístico para analizar la señalización dependiente de tioles y la función mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MPST (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MPST en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MPST junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MPST tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MPST.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MPST para la investigación de la señalización de MPST, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MPST críticos para la función de MPST
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MPST para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MPST CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MPST CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MPST. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MPST (h) y el plásmido HDR MPST (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MPST para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MPST definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.