Mox1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400951-ACT

O NOX1 humano (Mox1) codifica uma subunidade catalítica da NADPH oxidase que transfere elétrons para o oxigênio molecular, gerando superóxido e, a jusante, espécies reativas de oxigênio (ROS). As ROS derivadas de NOX1 atuam como segundos mensageiros que modulam redes de sinalização sensíveis ao estado redox, incluindo MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB, influenciando proliferação, diferenciação, migração e a expressão de genes inflamatórios. A função de Mox1 é acoplada a componentes organizadores/ativadores de membrana e citosólicos e contribui para respostas ao estresse oxidativo na membrana plasmática e em endomembranas. A atividade desregulada de NOX1 tem sido associada ao remodelamento epitelial e vascular, à patobiologia inflamatória e a contextos de sinalização relacionados ao câncer, nos quais a homeostase redox alterada pode remodelar programas transcricionais.

Mox1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mox1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mox1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mox1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mox1 em células tumorais com expressão de NOX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.