MKP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405872

Übersicht

DUSP9 kodiert die Dual‑Specificity‑Phosphatase 9 (MKP‑4), eine MAPK‑Phosphatase, die aktivierte MAP‑Kinasen durch Dephosphorylierung von Threonin‑ und Tyrosinresten abschaltet und so die Signalstärke reduziert. MKP‑4 ist an der negativen Feedback‑Kontrolle der ERK‑ und p38‑Kaskaden beteiligt und beeinflusst dadurch zelluläre Proliferation, Differenzierung sowie stressresponsive Transkriptionsprogramme. Indem DUSP9 die Dauer und Amplitude der MAPK‑Signalwege begrenzt, trägt es zur Regulation entzündlicher Signalübertragung und zu Zellschicksalsentscheidungen in unterschiedlichen Geweben bei. Eine Fehlregulation der DUSP9/MKP‑4‑Aktivität wurde mit veränderten MAPK‑Signalphänotypen in der Krebsbiologie, der metabolischen Regulation und in Modellen entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht, was es für mechanistische Signalwegstudien relevant macht.

Das MKP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUSP9-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUSP9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUSP9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MKP-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUSP9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MKP-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUSP9-Exone abzielen, die für die MKP-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUSP9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MKP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MKP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUSP9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MKP-4 HDR-Plasmid (h) und MKP-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUSP9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUSP9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.