Mitofilin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403617-ACT

ヒトのIMMTは、ミトフィリンをコードしている。ミトフィリンはミトコンドリア内膜の足場（スキャフォールド）として必須のタンパク質であり、MICOS（ミトコンドリア接触部位・クリステ形成制御システム）複合体の中核構成要素でもある。ミトフィリンはクリステ接合部（crista junction）の形成を調整し、呼吸鎖の構造的配置を安定化させ、膜間接触部位におけるミトコンドリアタンパク質の取り込みおよび脂質輸送を支えることで、ミトコンドリアの構造を酸化的リン酸化や代謝恒常性と結び付けている。IMMTに依存するクリステ構造の破綻は、ミトコンドリア動態の変化、エネルギー産生能の低下、ならびに細胞ストレス応答への感受性の増大と関連する。IMMTは、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患の文脈で検討されており、神経変性疾患や心代謝疾患の病態生物学において、クリステのリモデリングがシグナル伝達や細胞生存経路に影響し得ることが示されている。

Mitofilin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IMMTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mitofilin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IMMT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIMMT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mitofilinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIMMT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMitofilin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIMMT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMitofilin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。