MIP-3α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422839

Panoramica

Ccl20 codifica la chemochina macrophage inflammatory protein-3 alpha (MIP-3α), un ligando secreto di CCR6 che indirizza la chemiotassi di cellule dendritiche immature, linfociti T della memoria e linfociti B verso siti di attivazione epiteliale. Indotto da NF-κB e da citochine proinfiammatorie, CCL20 partecipa al traffico leucocitario, alla sorveglianza immunitaria mucosale e all’organizzazione di microambienti infiammatori. Una segnalazione CCL20–CCR6 deregolata è stata associata a processi infiammatori cronici e alla patobiologia autoimmune, ed è frequentemente studiata nel contesto della disfunzione della barriera epiteliale e del reclutamento di cellule immunitarie associato ai tumori. Nel topo, Ccl20 rappresenta un nodo sperimentalmente maneggevole per analizzare la migrazione cellulare guidata da chemochine e le reti citochiniche nella ricerca su immunologia e infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-3α (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl20 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl20 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl20 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MIP-3α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl20 per lo studio della segnalazione di MIP-3α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl20 critici per la funzione di MIP-3α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl20 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MIP-3α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MIP-3α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl20. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MIP-3α Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MIP-3α (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl20 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl20 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.