mGluR-8a/b/c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420695

Visão geral

Grm8 codifica o receptor metabotrópico de glutamato 8 (mGluR-8a/b/c), um GPCR do grupo III que se acopla principalmente a proteínas Gi/o para reduzir a atividade da adenilil ciclase, modular a sinalização de cAMP/PKA e regular a libertação presináptica de neurotransmissores. A atividade do mGluR8 influencia a transmissão e a plasticidade sinápticas ao ajustar a função de canais iónicos e a probabilidade de libertação de vesículas, integrando a sinalização glutamatérgica ao longo dos circuitos neurais. No rato, o Grm8 é estudado no contexto do equilíbrio excitatório/inibitório e de mecanismos ao nível dos circuitos que moldam o processamento sensorial, a aprendizagem e comportamentos responsivos ao stress. A desregulação da sinalização de recetores de glutamato, incluindo os mGluRs do grupo III, é frequentemente investigada pelas suas contribuições para fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos em modelos experimentais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO mGluR-8a/b/c (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Grm8 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Grm8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Grm8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína mGluR-8a/b/c.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Grm8 para a investigação da sinalização de mGluR-8a/b/c, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Grm8 críticos para a função mGluR-8a/b/c
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Grm8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo mGluR-8a/b/c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo mGluR-8a/b/c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Grm8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo mGluR-8a/b/c Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR mGluR-8a/b/c (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Grm8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Grm8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.