mGluR-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404012-ACT

GRM3 codifica o receptor metabotrópico de glutamato humano 3 (mGluR-3), um GPCR de classe C que modula a transmissão sináptica ao detectar glutamato extracelular e acoplar-se principalmente a proteínas Gi/o. A ativação do receptor inibe a adenilil ciclase, reduz a sinalização de cAMP e molda respostas a jusante dependentes de PKA, ao mesmo tempo que influencia as vias MAPK/ERK e relacionadas à PI3K, que afetam a excitabilidade e a plasticidade neuronais. O mGluR-3 é expresso em neurônios e em células gliais, onde contribui para o controle pré-sináptico da liberação de neurotransmissores e para a regulação da sinalização neuroinflamatória. Alterações na atividade ou na expressão de GRM3 têm sido investigadas no contexto da biologia de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de redes de sinalização glutamatérgica.

mGluR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRM3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mGluR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRM3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRM3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mGluR-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRM3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mGluR-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mGluR-3 em células tumorais com expressão de GRM3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.