MGC29506 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406694

Descripción general

MZB1 (también conocido como MGC29506) codifica una proteína luminal del retículo endoplásmico, enriquecida en células del linaje B, que favorece la diferenciación de células plasmáticas y la biosíntesis de inmunoglobulinas. Funciona como co-chaperona dentro de la red de proteostasis del RE, coordinando el plegamiento oxidativo y el control de calidad mediante interacciones con los sistemas de chaperonas GRP94/HSP90B1 y BiP/HSPA5, y contribuyendo a la señalización del estrés del RE y de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). Al modular la capacidad de la vía secretora y el manejo de proteínas mal plegadas, MZB1 influye en los programas de secreción de anticuerpos y en la homeostasis de las células B. La expresión desregulada se ha asociado con estados anómalos de células plasmáticas y con fisiopatología relacionada con el sistema inmunitario, lo que la hace relevante para estudios sobre maduración de células B, adaptación al estrés del RE y biología de células secretoras.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MGC29506 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MZB1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MZB1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MZB1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MGC29506.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MZB1 para la investigación de la señalización de MGC29506, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MZB1 críticos para la función de MGC29506
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MZB1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MGC29506 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MGC29506 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MZB1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MGC29506 (h) y el plásmido HDR MGC29506 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MZB1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MZB1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.