Plásmido CRISPR de Activación (h) melanotransferrin: sc-404111-ACT

El gen humano **MELTF** codifica la **melanotransferrina**, una glucoproteína de unión al hierro asociada a la membrana, implicada en el manejo celular del hierro y en el tráfico relacionado con la transferrina. Más allá del transporte de metales, la melanotransferrina se ha vinculado con la regulación de la adhesión celular, la migración y procesos endocíticos, conectándola con vías que moldean la dinámica de la membrana y las interacciones extracelulares. Se han reportado alteraciones en la expresión de **MELTF** en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluidos la biología del cáncer y la neuroinflamación, donde con frecuencia se observan cambios en la homeostasis del hierro y en programas de motilidad celular. Como molécula asociada a la superficie, la melanotransferrina también se utiliza como marcador para investigar la heterogeneidad fenotípica en modelos celulares humanos.

melanotransferrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MELTF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

melanotransferrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MELTF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MELTF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de melanotransferrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MELTF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de melanotransferrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía melanotransferrin en células tumorales con expresión de MELTF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.